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沉降菌检测培训(上传)

发布时间:2020-09-23 03:29  

  沉降菌检测培训(上传)_基础医学_医药卫生_专业资料。员工内部培训教材 沉降菌检测培训 XXXXXX有限公司 2016年07月14日 沉 降 菌 检 测 培 训 执行标准: GB/T16294-2010《医药工业洁净室(区)沉降 菌的测试方法》

  员工内部培训教材 沉降菌检测培训 XXXXXX有限公司 2016年07月14日 沉 降 菌 检 测 培 训 执行标准: GB/T16294-2010《医药工业洁净室(区)沉降 菌的测试方法》 沉降菌定义: 通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于 培养基平皿,经若干时间,在适宜的条件下让其 繁殖到可见的菌落进行计数,以平板培养皿中的 菌落数来判定洁净室环境内的活生物数,以此来 评定洁净室内(区)的洁净度。 需进行沉降菌检测的环境有: 十万级洁净室、一万级生化检测室、百级超净 工作台和百级生物安全柜。 沉 降 菌 检 测 培 训 使用仪器: 1、净化工作台 2、电热培养箱 3、霉菌培养箱 沉 降 菌 检 测 培 训 使用仪器: 4、立式压力蒸汽灭菌器 5、电子天平 6、电热恒温鼓风干燥箱 沉 降 菌 检 测 培 训 使用器具: 1、量筒 2、三角烧瓶 3、培养皿(φ90×15) 4、酒精灯 5、不锈钢培养皿筒 6、牛皮纸 7、称量纸 沉 降 菌 检 测 培 训 使用试剂: 1、大豆酪蛋白琼脂培养基 或:胰酪大豆胨琼脂培养基 或 2、沙氏葡萄糖琼脂培养基 3、纯化水 沉 降 菌 检 测 培 训 检测前准备:(在化验室内操作) 1、将培养皿洗净、沥干,放入不锈钢培养皿筒,在电 热恒温鼓风干燥箱内干烤。温度:160℃,时间:2小时。 2、根据需测量的区域确定培养皿的数量。 3、根据培养基用法及培养皿的数量确定培养基的数量 (ml),用电子天平进行秤量配制,装入三角烧瓶内,再 加入一定比例的纯化水,用硅胶塞塞住瓶口,用手腕晃动 至培养基完全熔化,用牛皮纸包扎好。 配制过程(以配制“胰酪大豆胨琼脂培养基”为例) 根据培养皿放置分布图确定培养皿数量,再加3个对照 试验培养皿。如:共需30个培养皿,每个培养皿注入15-20 ml培养基(按每个注入20 ml配制),则需培养基: 30个×20ml/个=600ml。 根据产品标签上用法说明:取本品40.0g,加1L纯化水, 微温溶解。 40 .0 秤量: 1000 ×600=24.0g, 注入纯化水:600ml。 注:其他培养基的配制按产品上的标签用法类似配制。 检测前准备: 沉 降 菌 检 测 培 训 4、把包扎好的三角烧瓶放入立式压力蒸汽灭菌器中灭菌, 温度:121℃,AG8国际大厅登录。时间:15分钟。 5、把培养皿、配制好的培养基按《物品进出洁净室控制程 序》进入无菌检验室。 6、操作人员按《人员进出洁净室控制程序》进入操作室。 无菌室操作: 1、开启净化工作台电源,在净化工作台内进行操作。 2、点燃酒精灯,打开三角烧瓶封口的牛皮纸,把三角烧瓶 的瓶口在酒精灯的外火焰处转动消毒,时间:30秒。 3、拔出三角烧瓶的硅胶塞,无菌操作把培养基注入培养皿 内,注入量为15-20ml,(注入时,应一手拿三角烧瓶,一手拿 培养皿,用拿培养皿手的中指、无名指和小指抵住培养皿底,同 时用大姆指和食指移开培养皿盖,注入培养基,整个过程尽量靠 近燃烧的酒精灯,严禁在移开的培养皿上部有任何物品经过,防 止产生假阳性。)加盖放在净化工作台内,直至所有的培养皿注 入完毕,待至凝固(此时底下盖上)。 4、凝固后反扣叠放不锈钢培养筒内,盖好培养筒盖,出无 菌室至室外待用。(反扣:培养皿底上盖下,防止冷凝水滴至培 养基上,影响培养基效果。) 检测: 1、最少采样点数量的确定: 沉 降 菌 检 测 培 训 房间面积 (m2) <10 ≥10~<20 ≥20~<40 ≥40~<100 ≥100~<200 ≥200~<400 ≥400~<1000 ≥1000~<2000 ≥2000 洁净度级别 100(A级) 2-3 4 8 16 40 80 160 400 800 10000(C级) 100000(D级) 2 2 2 4 10 20 40 100 200 洁净度级别 2 2 2 2 3 6 13 32 63 2、最少培养皿数: 所需培养皿数 (沉降0.5小时) 100(A级) 14 10000(C级) 2 100000(D级) 2 检测: 沉 降 菌 检 测 培 训 3、采样点布置类型: 根据采样点布置类型,制定出本公司各被测采样点的分布图,按 制定的采样分布图进行采样。 检测: 沉 降 菌 检 测 培 训 4、开启被测环境净化空气调节系统,30分钟后,可以开始测试 静态沉降菌测试。 5、配制好的培养皿按《物品进出洁净室控制程序》进入被测环 境。 6、操作人员按《人员进出洁净室控制程序》进入被测环境。 7、培养皿的放置原则: a、采样点尽量离地面0.8~1.5米。 b、每个采样点一般至少采样一次。 c、尽量避开尘粒较集中的回风口。 d、采样时,就从里往外放置,放置人员应站在采样的下风侧, 放置时,尽量少走动。 8、按事先制定的采样布点图放置,放置时应考虑第7点的放置原 则,逐个放置,逐个打开培养皿上盖,使培养基暴露在环境空气 中。打开时,用一手的大拇指和食指轻轻移开上盖,人体任何部 位应尽量远离培养皿上部,防止产生假阳性。 9、检测净化工作台(百级)或生物安全柜时,按最少培养皿数 要求,把14个培养皿均匀放在工作台上,然后从里往外逐个打开, 使其培养基暴露有空气中。 检测: 沉 降 菌 检 测 培 训 10、培养基在空气中暴露30分钟后,从外往里逐个盖好上盖并反 扣培养皿,放入不锈钢培养皿筒内。 11、收集完毕,按《物品进出洁净室控制程序》、《人员进出洁 净室控制程序》出被测洁净区域。 12、以胰酪大豆胨琼脂培养基进行培养时,培养皿应放置电热培 养箱内进行培养,培养温度:30℃~35℃ ,培养时间:至少48小 时(2天)。 若用大豆酪蛋白琼脂培养基进行培养时,培养皿也应放置电热 培养箱内进行培养,培养温度:30℃~35℃ ,培养时间:至少48 小时(2天)。 若用沙氏葡萄糖琼脂培养基进行培养时,培养皿应放置霉菌培 养箱内进行培养,培养温度:20℃~25℃ ,培养时间:至少120小 时(5天)。 注:为防止假阳性,另需准备三个培养皿,注入培养基,但不进 行空气暴露,随同上述培养皿一起培养。 13、培养时间到后,用肉眼观察培养皿中的菌落数,数菌落数时 要注意菌落重叠生成。 M 1 ? M 2 ? ?? Mn M = n 14、做好各被测区域的沉降菌菌落的数据记录。 判定: 沉 降 菌 检 测 培 训 依据下表判定: 对照组无菌生长的情况下,培养皿中的菌落数满足下表,判 定:合格。不满足下表,判定:不合格。 如对照组有菌落生成,此检测过程失败,需重新检测。 洁净室(区)沉降菌技术要求 洁净度级别 菌落数(沉降菌/皿) 100(A级) 10000(C级) 100000(D级) 对照培养皿 ≤1 ≤3 ≤10 0 检测频率: 每周一次。 注意事项: 沉 降 菌 检 测 培 训 1、被测环境要求: 被测区域的温、湿度和静压差、换气次数等 各项指标应在规定的范围内。 2、无菌操作的培养基必须经过灭菌: 带入无菌室内的盛有培养基的三角烧瓶,必 须是融化的、经过灭菌的培养基,温度需控制在 40℃~50℃。 谢谢! xxxxxxxxxxxxx有限公司 吴忠良 2016年07月14日